Life细胞凋亡产品线粒体功能

 

膜电位——可固定探针

MitoTracker 染料为依赖细胞膜电位的探针，可针对红细胞中的线粒体进行染色。与膜去极化的线粒体相比，MitoTracker 染料在正常运作的线粒体中会产生较强的荧光信号，因此可用于辨识细胞群体中的健康细胞。即便经过后续的免疫细胞化学、DNA末端标记、原位杂交或复染后，MitoTracker 的染色结果仍能保持不变。MitoTracker Red CMXRos(图4)与绿色荧光染料共用时，呈现极低的光谱重叠，而MitoTracker Orange CMTMRos则能与远红荧光染料共用。MitoTracker  Red CM-H2Xros及MitoTracker? Orange CM-H2TMRos为需极低荧光背景的实验的最佳选择。

右图. 以MitoTracker Red CMXRos分析线粒体膜电位。 取自牛肺动脉的内皮活细胞同时以50 nM LysoTracker Blue-White DPX、Dapoxyl 衍生物及100 nM MitoTracker Red CMXRos进行染色。

膜电位——不可固定探针

该类染料能针对细胞凋亡时的线粒体膜电位丧失提供快速、简单且可靠的检测。

1.JC-1为阳离子染料，在线粒体中会依据电位而累积，放射出的荧光会因此由绿色(~525 nm)位移至红色(~590 nm)，可有效应用于比例测量(图5和6)

2.MitoProbe  DilC1(5)及MitoProbe? DiOC2(3) Assay Kit包含carbocyanine染料，可用于测定线粒体膜电位。前者可由红光激发，后者可由蓝光激发。

3.Rhodamine 123及dihydrorhodamine 123可轻易地经运行中的线粒体隔离，而不会导致细胞毒性。这类Rhodamine染料能快速吸收并达到平衡——仅需数分钟的时间，相比之下，其他膜电位敏感染料则需30分钟以上。

4.Tetramethylrhodamine的甲基酯及乙基酯(分别为TMRM及TMRE)可有效用于包含绿色荧光染料的多重颜色应用方法。

左图. 以JC-1分析线粒体膜电位。 NIH/3T3小鼠纤维母细胞以JC-1染色， 再用过氧化氢处理。以渐进式图像 显示相同图像视野下的细胞在H2O2 处理前后的情形，红色的聚合荧光 减少，而绿色单体荧光则在细 胞质中扩散。

上图. 以MitoProbe JC-1 Assay Kit (M34152)针对Jurkat细胞进行流式分析。Jurkat细胞以2 μM JC-1于37℃、5% CO2之下染色15分钟，再以PBS冲洗，在流式细胞仪中分析。(A)未处理的细胞。(B)在37℃下用10 μM 喜树碱处理4小时以诱导凋亡细胞

线粒体通透孔

线粒体通透孔是由线粒体内外膜成分所构成的非特异性通道，参与了细胞凋亡及坏死时线粒体内成分的释放。MitoProbe? Transition Pore Assay Kit相比于仅依赖线粒体膜电位的实验方法而言，对于线粒体通透性通透孔的开启提供了更直接的测量方法。