凋亡检测必备品:Accutase细胞分离溶液

在体外培养黏附细胞时，常常需要消化分离细胞，消化分离的细胞后续进行细胞转染实验、细胞迁徙实验、细胞增殖实验、及分析检测（如流式细胞术）。对大多数应用，常用蛋白酶消化分离细胞，然而这些酶（如胰酶）对细胞损伤比较厉害，作用于细胞膜上的蛋白与基质，而且还需要淬灭失活。而Accutase细胞分离溶液是一种胶原酶制备物，可安全有效的消化分离细胞，无需任何添加血清失活操作。研究证明，利用Accutase细胞分离溶液分离细胞传代培养数代，对细胞生长形态、多潜能的标记抗原分子都维持的很正常。

Accutase酶具有以下无可比拟的优势：

►    温和快速高效地消化细胞，而不会破坏抗原表位影响流式分析(图1,2)

►    消化hESCs更加温和，且保持其未分化状态(图3,4)

►    保持细胞最大的活力

►    最高的铺板效率

►    无需洗涤或中和，加入培养基即可使Accutase酶失活，节省时间

►    同时具备蛋白酶和溶胶原活性，适合大部分细胞，应用更广泛

►    可用于组织解离，进行原代细胞培养

►    价格低，即用型，严格质控

►    无需分装，4℃可稳定保存2个月，-20℃可稳定保存2年
 

图1.细胞消化。 Accutase酶处理人MG63纤维肉瘤细胞， 细胞快速脱落，消化为单个细胞，且 具有高活力。即使处理45min后，细 胞活力仍达到97±3%。

图2. 消化前后的比较。Accutase处理前，细胞呈单层贴壁(左图)； Accutase酶处理后，显微镜下观察不到细胞，说明消化得很彻底。

已在以下细胞中得到验证：

成纤维细胞、角蛋白细胞、血管内皮细胞、肝细胞、血管平滑肌细胞、肝细胞前体细胞、原代鸡胚神经元细胞、骨髓干细胞、CHO和BHK贴壁细胞、巨噬细胞、293细胞、L929细胞、永生小鼠生殖细胞、3T3、Vero、COS、HeLa、NT2、MG63、M24和A375转移性黑素瘤、神经胶质瘤U251和D54、HT1080纤维肉瘤细胞和Sf9昆虫细胞等。

即使您的细胞不在列举之列，不妨也可以尝试一下

操作过程：

1. 在室温或37°C溶解Accutase。

2. 用无菌PBS洗板或瓶。

3. 加入Accutase溶液，表面区域75 cm2时加入10 ml Accutase溶液，按比例加入。

4. 37°C 消化5-10分钟。

5. 进行后续操作，无需加入任何酶抑制剂。

联科公司实际测试结果：

不使用Accutase		使用Accutase
细胞肿胀变大，提示死细胞较多		细胞相对集中

裸核多，死细胞多	裸核基本消失，死细胞减少

应用范围：

Accutase在分离细胞方面具有独特优势，主要应用于：细胞表面标记分析，病毒扩增试验，血清缺乏细胞休眠分析，转染致癌基因变态分析，神经嵴细胞迁移分析，细胞增殖分析，细胞结合位点分析，肿瘤细胞迁移分析，细胞通道常规分析，产物扩增（生物反应器）和流式细胞技术。