流式实验中同型对照的选择方法

抗体有时会因为非特异的蛋白-蛋白相互作用结合细胞内成分，因为疏水作用结合脂肪，也可能会结合一些细胞表面的抗体受体。比如说，
IgG亚型的抗体会结合细胞表面的Fc受体，如CD16、CD32和CD64等。理想条件下，各种类型的非特异性结合都可以通过蛋白（BSA、牛奶或动物血清）来阻断。Fc受体的结合则可以通过与含免疫球蛋白的血清预孵育来阻断。所以一个抗体非特异性相互作用及与Fc受体结合的情况，都可以用无关抗原的相同亚型抗体来比照，即同型对照。那么如何选择同型对照呢？

1、 一般选择与一抗的成分完全相同种属来源、相同亚型和亚链、相同荧光标记的抗体。比如抗人的CD56 FITC标记的抗体，成份是MouseIgG1,κ，那么它的同型对照应该是FITC标记的MouseIgG1,κ。

2、如果抗体是组合形式，如纯化的一抗＋荧光标记的二抗，那么应该选择一抗的同型对照。比如CD86的纯化抗体，成分是Mouse IgG1,κ，它的同型对照是纯化的Mouse IgG1,κ，它的二抗PE标记的抗小鼠IgG1。那么染色方式如下：样本管：纯化的CD86＋PE标记的抗小鼠
IgG1(二抗)＋样本，同型对照管：纯化的同型对照＋PE标记的抗小鼠IgG1(二抗 )＋样本。

3、如果没有找到完全匹配的同型对照，在保持来源相同、荧光标记相同、免疫球蛋白类别相同条件下，优先选择的顺序应该是亚链不同－－亚型不同。比如，某种的抗体的来源是Mouse IgG2а,κ。如果找不到完全相同的同型对照，那么优先选择相同荧光标记Mouse IgG2а；如果也没有找到Mouse IgG2а，那么优先选择相同荧光标记的Mouse IgG2b；如果最后还是没有找到Mouse IgG2b，那么选择相同荧光标记的Mouse IgG2作为同型对照。