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流式仪器中的碘化丙啶(PI)清洗

点击次数:1343 次    更新时间:2017-07-28

流式仪器中的碘化丙啶(PI)清洗

作者:佚名    发布日期:2017-07-28 09:00

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流式仪器中的碘化丙啶(PI)清洗

在细胞周期检测或细胞死活鉴别中,经常会用到一些核酸染料,最常用的就是碘化丙啶(简称PI)。然而,PI用着方便、简单、便宜,但可能给管路清洗带来很大的麻烦,所以很多中心不愿意将机器给大家用来做细胞周期。另外,不仅仅是碘化丙啶,其它如7-AAD等核酸染料均存在粘附在液流系统中的风险。


但实际上,只要清洗得当,还是没关系的,大家无需过于担心。这里介绍一些国外FLOWER总结的清洗绝招,既有经验之谈,也有天马行空的脑洞。大家可根据需要选择一种试试,好好爱护我们娇贵的流式细胞仪器。


方法1: 先跑一会儿DMSO,然后再用蒸馏水冲洗

由于PI在DMSO中的溶解度较高,所以可以考虑用DMSO先冲洗液路,但是国外有流式战友试了之后效果不是特别理想。

另外一个选择就是先用DMSO跑5分钟,然后再用仪器厂家清洗液上仪器跑5分钟,最后再用蒸馏水跑5分钟。但结果似乎也不是特别理想。

 

方法2: 先跑乙醇,再用蒸馏水冲洗

利用乙醇溶解度高的原理,将残留的PI除去,但实测似乎效果也一般。

 

方法3 :用次氯酸钠

这是最传统常用的方法;用终浓度 0.1~0.5%的次氯酸钠溶液清洗。

对于特别粘冲的染料(例如AO、7-AAD等),有用户建议在步骤上增加70%乙醇,也就是说:

1、将终浓度0.1~0.5%的次氯酸钠溶液浸泡上样针,将支撑架打到一边,让上样针吸取1分钟,然后支撑架打回来,按照正常跑5分钟。

2、用70%乙醇,重复第一步步骤。

3、用蒸馏水,重复第一步步骤。

切记,每根管子跑完之后都要扔掉,不要重复使用。


除了常规的一些办法,还有一些比较另类的处理方式。

 

方法4 : PI喜欢DNA,那么就用DNA来解决

这个原理很有意思,就是利用PI容易与DNA结合的方式,用放置了很长时间的外周血样本,由于标本中的细胞基本上都碎了,所以白细胞释放出大量的DNA。新加坡的Te Chih推荐可以用这类标本上机,利用DNA结合残留的PI。

 

方法5: 咖啡因

这个Idea更有意思,实属天马行空,但却有文章实实在在的作为技术支撑。

大多数荧光染料通过静电可粘附在流式细胞仪液路上,从而对后续样品中的细胞产生影响。Bedner等人观察到,除了漂白水以外,也可以利用咖啡因溶液(例如以PBS配制的50mM咖啡因溶液)去除液路中或已被荧光染料污染的细胞中的粘附荧光素。 咖啡因对PI或吖啶染料有相当高的亲和力,并且可以用于从染色的细胞、染色的凝胶以及静电结合这些染料的细胞、玻璃或塑料表面去除这些异常粘附的染料。


参考文献:Bedner E, Du L, Traganos F, Darzynkiewicz Z. Caffeine dissociates complexes between DNA and intercalating dyes: application for bleaching fluorochrome-stained cells for their subsequent restaining and analysis by laser scanning cytometry. Cytometry. 2001 Jan 1;43(1):38-45. (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11122483)